El diagnóstico por laboratorio se establece al demostrar la presencia de bacilos acidoresistentes en el raspado de fisuras cutáneas o del tabique nasal en frotis. La biopsia cutánea o de los nervios afectados engrosados, también proporciona un cuadro histológico típico.

El Myobacterium leprae no se ha podido desarrollar en medios de cultivo, pero se multiplica en las patas de ratones y en armadillos, inyectados experimentalmente.