El chancro blanco puede ser diagnosticado y tratado por urólogos, ginecólogos  y especialistas en enfermedades infecciosas. Parte del diagnóstico del chancro blanco implica descartar el herpes genital y la sífilis, porque las úlceras genitales son también síntomas de estas enfermedades. La apariencia de estas tres enfermedades es lo suficientemente similar como para confundirlas. Sin embargo, la presencia de una masa llena de pus en la ingle de un paciente con una úlcera genital es muy específica del chancro blando.

Para  un diagnóstico claro del chancro blanco, el Haemophilus ducreyi debe aislarse de la úlcera. Para ello se limpia la úlcera con un hisopo de algodón estéril para obtener una muestra de pus. En el laboratorio, la muestra se pone en un papel especial y se coloca en una incubadora. El Haemophilus ducreyi tarda de 2-5 días para crecer en el laboratorio. Además, el pus puede ser examinado bajo el microscopio para ver qué bacterias hay en la úlcera. Una muestra de pus también puede ser analizada para ver si está presente el virus del herpes.  Probablemente se extraerá una muestra de sangre del paciente para detectar la presencia de anticuerpos contra la bacteria que causa la sífilis.