La listeriosis puede ser diagnosticada y tratada por especialistas en enfermedades infecciosas y especialistas en medicina interna.

La única manera de diagnosticar la listeriosis es aislar la Listeria monocytogenes de la sangre, del líquido cefalorraquídeo o de las heces. Se extrae una muestra de líquido cefalorraquídeo  de la médula espinal con una aguja y una jeringa. Este procedimiento se llama punción lumbar. El líquido amniótico (el líquido que baña al feto) puede ser examinado en mujeres embarazadas con listeriosis. Esta muestra se obtiene mediante la inserción de una aguja a través del abdomen para extraer el líquido. La Listeria crece bien en medios de laboratorio y los resultados de las pruebas están listos en unos pocos días.